熒光定量PCR儀器是用于實時監測(ce)PCR擴增過(guo)程(cheng)的高精(jing)度設備,單通(tong)(tong)道8孔(kong)設計。其(qi)通(tong)(tong)過(guo)結合PCR擴增與熒光檢(jian)測(ce)技術,實現核酸靶標(biao)的快速精(jing)準(zhun)定量分析(xi)(xi),服務于分子診斷、病原(yuan)體檢(jian)測(ce)、基因表達分析(xi)(xi)及生命(ming)科學研究(jiu)等領域。
熒光定量PCR儀器是一(yi)種用(yong)于實(shi)時(shi)(shi)監測聚合酶鏈式反應(ying)(PCR)過(guo)程的(de)高(gao)精度分(fen)析設備(bei)。它的(de)核心功能在于,通過(guo)在PCR擴(kuo)增(zeng)反應(ying)體(ti)系中加入熒光基團,并利用(yong)光學系統對反應(ying)管(guan)內的(de)熒光信(xin)號進行實(shi)時(shi)(shi)采集(ji),從而實(shi)現對目(mu)標核酸片(pian)段(DNA或cDNA)的(de)定量(liang)與定性分(fen)析。這一(yi)技術(shu)將傳統的(de)終點(dian)PCR檢測,升級為可觀測整個擴(kuo)增(zeng)進程的(de)動(dong)態定量(liang)分(fen)析。
該儀器的(de)基本原理是(shi),在PCR循環的(de)每個延伸步驟結束后,檢測與擴(kuo)增(zeng)產物特異性結合的(de)熒光(guang)染料的(de)信(xin)號(hao)強度。隨著目(mu)標核(he)酸(suan)(suan)片段以(yi)指數(shu)方式(shi)擴(kuo)增(zeng),熒光(guang)信(xin)號(hao)也相(xiang)應(ying)增(zeng)強。儀器內置的(de)軟件實時繪制出(chu)熒光(guang)強度隨循環數(shu)變化的(de)擴(kuo)增(zeng)曲線。通過(guo)對曲線的(de)分析,特別是(shi)循環閾值(Ct值)的(de)確定,可(ke)以(yi)精確計算出(chu)反應(ying)起始時模板(ban)核(he)酸(suan)(suan)的(de)初(chu)始濃(nong)度,實現絕對定量或相(xiang)對定量。
以單通道(dao)8孔機型為例,這(zhe)類儀器結構緊(jin)湊,適用于樣本量(liang)適中(zhong)的(de)(de)(de)實(shi)驗室(shi)。其關鍵性(xing)能特點包括精確(que)的(de)(de)(de)溫度控制系(xi)統。PCR反應對溫度變化(hua)的(de)(de)(de)敏感性(xing)極高,儀器需要確(que)保樣品(pin)孔間以及(ji)孔內溫度的(de)(de)(de)均勻性(xing)與準確(que)性(xing),這(zhe)是獲(huo)得(de)可(ke)靠、可(ke)重復擴增結果的(de)(de)(de)基(ji)礎。此外,儀器通常配備高效的(de)(de)(de)光(guang)學檢(jian)測(ce)模塊,能夠靈(ling)敏地捕(bu)捉微弱的(de)(de)(de)熒光(guang)信號(hao)變化(hua)。配套的(de)(de)(de)數(shu)據管理軟(ruan)件(jian)(jian)則(ze)提(ti)供了從實(shi)驗設置、數(shu)據采(cai)集(ji)、曲線分析(xi)到結果報告的(de)(de)(de)完整解(jie)決方(fang)案,部分軟(ruan)件(jian)(jian)支(zhi)持(chi)多(duo)通道(dao)多(duo)重檢(jian)測(ce)的(de)(de)(de)數(shu)據解(jie)析(xi)。
在實際應用中,熒光定量PCR儀器的(de)用途十(shi)分(fen)廣(guang)泛(fan)。在分(fen)子診(zhen)斷(duan)與臨床檢測領域(yu),它(ta)是(shi)病原體(如(ru)病毒(du)、細菌)核酸(suan)檢測的(de)核心工具,用于傳染病診(zhen)斷(duan)、載(zai)量監(jian)測,以及遺傳病基(ji)因(yin)突變篩查(cha)。在生命(ming)科(ke)(ke)學(xue)研(yan)(yan)(yan)究中,科(ke)(ke)研(yan)(yan)(yan)人(ren)員利(li)用它(ta)進行(xing)基(ji)因(yin)表達差(cha)異分(fen)析(xi)(如(ru)比較不(bu)同組(zu)織或(huo)處理條件下(xia)特定基(ji)因(yin)的(de)mRNA表達水平)、microRNA研(yan)(yan)(yan)究、單核苷酸(suan)多(duo)態性(SNP)分(fen)型等(deng)。其(qi)定量能力(li)使得研(yan)(yan)(yan)究從“是(shi)否存(cun)在”深入(ru)到“有多(duo)少”的(de)層面(mian)。
操作時,用戶需將準(zhun)備好(hao)的(de)反應體系置(zhi)于儀器的(de)樣品(pin)孔中,設(she)置(zhi)好(hao)擴增(zeng)程序(包括變性、退火、延伸的(de)溫度與(yu)時間(jian)參(can)數)和(he)熒光采(cai)集方(fang)案(an)。儀器運(yun)(yun)行期間(jian)無需人工干預,自動(dong)完(wan)成所(suo)有(you)循(xun)環并記錄數據。運(yun)(yun)行結束后,用戶可通過軟件立(li)即查(cha)看擴增(zeng)曲線和(he)定(ding)量結果。
因此,熒光定量PCR儀器(qi)憑(ping)借(jie)其實時、定量、高(gao)特異性和高(gao)靈敏度(du)的技(ji)術優(you)勢,已成為現(xian)代分子生物學實驗(yan)室、臨(lin)床檢驗(yan)中心及疾(ji)(ji)病預防控(kong)制機構不可(ke)或缺的標準(zhun)設備。它推動了核酸(suan)檢測(ce)從定性到定量的跨越(yue),為精(jing)準(zhun)醫療(liao)、疾(ji)(ji)病防控(kong)和前沿生命科學研究提(ti)供了強有(you)力的技(ji)術支撐。
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