松材線蟲快速檢測儀是應用(yong)(yong)分(fen)(fen)子生物(wu)學技術的專業設(she)備(bei),通過集成松材線蟲分(fen)(fen)離、DNA提(ti)取與(yu)熒光定量PCR檢(jian)測流程,實現對該有害(hai)生物(wu)的快(kuai)速自動(dong)檢(jian)測。儀器自動(dong)分(fen)(fen)析并顯(xian)示結果、打(da)印(yin)報告,無需人工判讀,用(yong)(yong)于林業檢(jian)疫(yi)與(yu)疫(yi)木排查。
松材線蟲快速檢測儀是一(yi)種基于(yu)分子檢(jian)測(ce)技(ji)術的實(shi)驗(yan)室儀器,專門用(yong)于(yu)對松(song)材線(xian)(xian)蟲進行(xing)定性(xing)與(yu)定量分析。松(song)材線(xian)(xian)蟲是引發(fa)松(song)樹(shu)萎(wei)蔫病(bing)、導致松(song)林(lin)大面積枯死(si)的毀滅性(xing)病(bing)原生物(wu)。傳(chuan)統(tong)形態(tai)學鑒定方法(fa)耗時費力(li)且對專業人員依賴度(du)高,該設(she)備(bei)的出(chu)現旨在實(shi)現快速、準確、標(biao)準化的檢(jian)測(ce),服務于(yu)林(lin)業檢(jian)疫(yi)、疫(yi)情監測(ce)與(yu)疫(yi)木清理等環節。
該檢測儀(yi)的(de)核心技術原理是(shi)熒(ying)光(guang)定量PCR。這是(shi)一種(zhong)在PCR擴增過程中,通過熒(ying)光(guang)信(xin)號(hao)實時監測靶標DNA數量,從而(er)對(dui)(dui)起始模(mo)板進行定量的(de)分子生(sheng)物學技術。針(zhen)對(dui)(dui)松材線(xian)蟲(chong)的(de)特異性DNA序列設(she)計引物與熒(ying)光(guang)探針(zhen),使得儀(yi)器能(neng)夠(gou)高特異性地識別(bie)出(chu)樣本中是(shi)否含(han)(han)有松材線(xian)蟲(chong)的(de)遺傳物質,并能(neng)估算其相對(dui)(dui)含(han)(han)量。
一套完整(zheng)的檢測流程主要包含三個自動化或高度集成(cheng)的步驟。第一步是松材(cai)線(xian)蟲的分離(li)與樣(yang)本(ben)制備。操作(zuo)人員(yuan)將(jiang)疑似感病的松木(mu)木(mu)屑或鉆取的木(mu)芯樣(yang)本(ben)放入設備配(pei)套的均質(zhi)或離(li)心裝置(zhi)中。部分集成(cheng)化高的系統能自動完成(cheng)樣(yang)本(ben)的破碎(sui)與線(xian)蟲的初步富集,為下一步提取提供預處理樣(yang)本(ben)。
第二步是(shi)(shi)DNA的(de)提(ti)取與純化。預處理后的(de)樣(yang)本被轉(zhuan)移至核酸提(ti)取模(mo)塊(kuai)(kuai)。該模(mo)塊(kuai)(kuai)通常采用磁(ci)珠(zhu)法(fa)(fa)或離心柱法(fa)(fa)等自動(dong)化方法(fa)(fa),通過裂解、結合、洗滌、洗脫一系(xi)列程序,自動(dong)從(cong)復(fu)雜(za)(za)樣(yang)本中提(ti)取出(chu)高純度的(de)總DNA,其中包括可能存在(zai)的(de)松(song)材線蟲DNA。這一步去(qu)除了抑制(zhi)后續PCR反應的(de)雜(za)(za)質(zhi),是(shi)(shi)關鍵的(de)前處理環節(jie)。
第三步是(shi)熒(ying)光定量(liang)PCR檢(jian)測與結(jie)果分析。純化后的(de)(de)DNA溶液被自動(dong)或手動(dong)加入(ru)含有(you)特(te)異性(xing)引物(wu)、探針及(ji)反應(ying)體系的(de)(de)檢(jian)測卡盒或微孔板(ban)中,并置入(ru)儀器(qi)的(de)(de)溫(wen)控檢(jian)測艙。設備按照預設程(cheng)序進行(xing)升溫(wen)、降溫(wen)循環(huan),驅動(dong)DNA的(de)(de)擴增,并實時監測每個循環(huan)后的(de)(de)熒(ying)光強度。全(quan)部過程(cheng)結(jie)束后,儀器(qi)內部的(de)(de)軟件會根(gen)據熒(ying)光曲線和設定的(de)(de)閾值,自動(dong)判定樣本(ben)的(de)(de)陰陽(yang)性(xing),并可根(gen)據標準曲線計(ji)算(suan)初(chu)始模板(ban)的(de)(de)拷(kao)貝數。結(jie)果直接在觸(chu)摸屏上顯示,并可連(lian)接打印機(ji)輸出標準格式的(de)(de)檢(jian)測報(bao)告(gao)。
該設備的(de)(de)(de)主要特(te)點是高效(xiao)、便(bian)捷與結(jie)(jie)果客觀。它(ta)將原本(ben)需要在多(duo)個實驗(yan)室儀器(qi)間(jian)轉移、由不同專業人員操作的(de)(de)(de)多(duo)步流程(cheng)整(zheng)合或串聯起來(lai),大幅縮短了檢測(ce)時間(jian),可(ke)在數(shu)小時內完成從樣本(ben)到(dao)報告的(de)(de)(de)全(quan)過程(cheng)。“快速”體現在流程(cheng)的(de)(de)(de)集成化(hua)(hua)與自動(dong)化(hua)(hua)上。其“無需人工判(pan)讀”的(de)(de)(de)特(te)點尤為(wei)重(zhong)(zhong)要,儀器(qi)依據算法和設定閾值進(jin)行客觀判(pan)斷,消除了不同人員因經驗(yan)差異導致的(de)(de)(de)判(pan)讀誤差,保證了檢測(ce)結(jie)(jie)果的(de)(de)(de)標(biao)準(zhun)化(hua)(hua)與可(ke)重(zhong)(zhong)復(fu)性。
在實際應用中,松材線蟲快速檢測儀主要(yao)用于(yu)兩個(ge)方面。一是(shi)用于(yu)森林(lin)病(bing)蟲(chong)害普查(cha)與(yu)疫情監測,對野外采集(ji)的(de)大量樣本進行(xing)(xing)快速篩(shai)查(cha),及(ji)時(shi)掌握疫情分(fen)布與(yu)擴散動(dong)態(tai)。二是(shi)用于(yu)木材流通環節的(de)檢疫,對調入(ru)調出的(de)松木及(ji)其制(zhi)品(pin)進行(xing)(xing)現場或實(shi)驗(yan)室(shi)快速查(cha)驗(yan),防(fang)止疫情通過人為(wei)運輸傳播。它為(wei)林(lin)業(ye)部門制(zhi)定防(fang)控策略、劃定疫區、評估除治效果(guo)提(ti)供了直接的(de)技術依據和數據支撐。
綜上所述,松材線蟲快(kuai)速(su)檢(jian)測(ce)(ce)儀是(shi)分(fen)子檢(jian)測(ce)(ce)技術(shu)在林業(ye)有害生(sheng)物防控領域的(de)(de)具體應(ying)(ying)用(yong)裝備。它(ta)通(tong)過(guo)將樣本處(chu)理(li)、核(he)酸(suan)擴增與結果(guo)分(fen)析自動化集成,實(shi)現了(le)對松材線蟲的(de)(de)快(kuai)速(su)、特異、客觀檢(jian)測(ce)(ce),提升了(le)林業(ye)檢(jian)疫工(gong)作的(de)(de)科技水(shui)平與響(xiang)應(ying)(ying)速(su)度,是(shi)保護森林資源(yuan)的(de)(de)重(zhong)要(yao)技術(shu)工(gong)具。
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